(1–1H-苯并咪唑-5-基氧基)-乙酸第三丁酯(800mg，1.58mmol)溶解於10ml二氯甲烷中，於室溫加入5ml三氟乙酸，加畢，繼續室溫反應2小時。 與實施例49的製備方法相同，除了用4-溴-2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-異吲哚-1,3-二酮代替實施例49步驟1中的3-(4-溴-1-側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，得到2,2-二甲基丙酸3–2,6-二側氧哌啶-1-基甲基酯。 與實施例2的製備方法相同，除了用化合物代替實施例2中的化合物，得到1-[4-(5–苯并咪唑-1-基)-苯基]-3-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-脲。 較佳地，A選自吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡咯基；其任選進一步被選自氫、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷氧基、羥基、胺基、醯基、酯基、C3-C6環烷基、5-6員雜環基、C6-C10芳基和5-6員雜芳基的基團所取代；較佳被C1-C6烷基所取代。 R1為氫，且A選自5至7員雜芳基，該5至7員雜芳基任選進一步被選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵烷氧基、羥基、胺基、醯基、酯基、C3-C6環烷基、5-6員雜環基、C6-C10芳基和5-6員雜芳基的一個或多個基團所取代。 於70℃，將1-(4-胺基苯基)-1H-苯并咪唑-5-醇(1.42g，6.31mmol)、7-溴庚酸乙酯(1.8g，7.59mmol)和碳酸銫(6.0g，18.40mml)在20ml DMF中攪拌1小時。
在一個較佳的實施方案中，在上述方法中，根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物可以與另外一種或多種藥物如癌症治療藥物或者治療方法如癌症治療方法同時、分別或相繼組合使用。 本發明還涉及一種降解和抑制FLT3酪胺酸激酶的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物。 本發明進一步涉及一種根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物，其用作雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑的用途。 在一個較佳的實施方案中，根據本發明所述的用途，其中根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物可以與另外一種或多種藥物如癌症治療藥物或者治療方法如癌症治療方法同時、分別或相繼組合使用。 本發明進一步涉及一種醫藥組成物，其含有治療有效量的根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體。 泛素，一種小蛋白分子，由76個胺基酸殘基組成，分子量約8.5kDa，具有高度保守的序列並且廣泛存在於真核生物體中。
將步驟1得到的(190mg，0.281mmol)溶解於二氯甲烷中，室溫加入三氟乙酸，加畢室溫反應1小時。 TLC檢測反應完全後，將反應液減壓濃縮，殘餘物加入100ml水溶解，胺水調節pH為8-9，用二氯甲烷50ml×2萃取。 有機相用飽和食鹽水100ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到60mg黃色固體狀產物。
將[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基]胺基甲酸第三丁酯(170g，0.829mol)溶解於1L二氯甲烷中，加入三乙胺(125.5g，1.243mol)，降溫至小於-5℃，緩慢滴入用200ml二氯甲烷稀釋的甲磺醯氯(113.4g，0.995mol)，保持溫度小於-5℃，10分鐘後滴畢，保持溫度攪拌20分鐘。 將反應液倒入200ml飽和食鹽水中，滴入乙酸(1.4當量)，用二氯甲烷200ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到190g淡黃色油狀粗品產物。 於室溫4–哌嗪-1-甲酸第三丁酯的製備(1.2g，2.74mmol)溶解於15mlDMF中，然後加入吡啶(325mg，4.11mmol)，冰鹽浴降溫至-5℃-0℃。 將氯甲酸苯酯(524mg，3.34mmol)慢慢滴加到上述溶液中，過程中控制溫度在-5℃-0℃。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入50ml水中，用 乙酸乙酯50ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水50ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.5g粗品產物。
- 術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基)，其中烷基和環烷基的定義如上所述。
- 4-哌啶基哌啶(841.4mg，5mmol)溶解於20mL二氯甲烷中，室溫加入三乙胺(1.01g，10mmol)，加畢，將反應體系降溫0-5℃。
- 與實施例74的製備方法相同，除了用4-(4-哌啶基)嗎啉代替實施例74步驟1中的4-哌啶基哌啶，得到4-嗎啉基哌啶-1-羧酸(3-(4-(5-((1-(4-(3-(5-(第三丁基)異噁唑-3-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊醯胺基)-1-側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基酯。
- 術語“烷基”指包括1至20個碳原子的飽和直鏈或支鏈脂族烴基團，較佳包含1至18個碳原子，更佳包含1至10個碳原子，更佳包含1至6個碳原子，甚至更佳包含1至4個碳原子。
- 將化合物14b(989mg，4.52mol)溶解於10ml二氯甲烷中，加入三乙胺(685mg，6.78mol)，降溫至小於-5℃，緩慢滴入用5ml二氯甲烷稀釋的甲磺醯氯(620mg，5.4mmol)，保持溫度小於-5℃，3分鐘後滴畢，保持溫度攪拌1小時。
細胞主要基因特徵分別來源於COSMIC Cell Lines Project和相關研究論文。 本發明的已知起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或購買自上海達瑞精細化學品有限公司、上海泰坦科技股份有限公司、上海潤捷化學試劑有限公司、TCI、Aldrich Chemical Company。 實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。 NMR的測定是用(Bruker AVANCE-400)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)、氘代氯仿、氘代甲醇，內標為四甲基矽烷。
- 本發明屬於醫藥領域，涉及一種新型雙功能蛋白降解靶向嵌合體類化合物、其製備方法及含有其的醫藥組成物，以及其用於降解和抑制FLT3酪胺酸蛋白激酶的用途，包括用於治療FLT3介導的信號通路異常引起的相關疾病的用途，特別是在癌症治療中的用途。
- 烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。
- 所得粗品於40ml甲基第三丁基醚中攪拌4小時，過濾，固體少量甲基第三丁基醚洗滌，鼓風乾燥(60℃)1小時，得3g白色固體狀的5-第三丁基-2-(2-嗎啉-4-基-乙基)-2H-吡唑-3-基胺。
- R5和R6與其連接的氮原子一起形成含氮雜環基，較佳5-7員含氮雜環基，該雜環基任選進一步被選自鹵素、C1-C6烷基、C3-C7環烷基、5-7員雜環基的一個或多個基團取代。
- 與實施例16步驟6的製備方法相同，除了用3-(4-溴-1-側氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮代替步驟6中的4-溴-2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-異吲哚-1,3-二酮，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3–乙氧基)-苯并咪唑-1-基]-苯基-脲。
將2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙-1-醇(5g，50mmol)溶解於60ml二氯甲烷中，加入三乙胺(10g，0.1mol)，降溫至小於-5℃，緩慢滴入甲磺醯氯(6.3g，55mmol)，保持溫度小於-5℃，10分鐘後滴畢，保持溫度攪拌20分鐘。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入100ml飽和碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷100ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到8.49g淡紅色油狀粗品產物。 術語“烷基”指包括1至20個碳原子的飽和直鏈或支鏈脂族烴基團，較佳包含1至18個碳原子，更佳包含1至10個碳原子，更佳包含1至6個碳原子，甚至更佳包含1至4個碳原子。 烷基的非限定性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、 新戊基、己基、異己基、正庚基、異庚基、正辛基、異辛基、正壬基、正癸基等。 化療方法 烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、硫醇、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、胺基、鹵烷基、羥烷基、羧基或羧酸酯基。 將化合物80(480mg，0.503mmol)溶解於4ml二氯甲烷中，將反應體系降溫到0-5℃，加入4ml三氟乙酸，加畢升溫至室溫反應2小時。
將化合物14b(989mg，4.52mol)溶解於10ml二氯甲烷中，加入三乙胺(685mg，6.78mol)，降溫至小於-5℃，緩慢滴入用5ml二氯甲烷稀釋的甲磺醯氯(620mg，5.4mmol)，保持溫度小於-5℃，3分鐘後滴畢，保持溫度攪拌1小時。 將反應液倒入50ml飽和食鹽水中，滴入乙酸(1.4當量)，用二氯甲烷50ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1.15g產物。 將化合物11b(3.5g，7.97mmol)溶解於30ml DMF中，加入疊氮化鈉(1.0g，15.40mmol)，於65℃攪拌2小時。 將反應液倒入100ml飽和食鹽水中，用乙酸乙酯100ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3g固體產物。 將(4-甲氧基-2-硝基-苯基)-(4-硝基-苯基)-胺(2.5g，8.65mmol)、還原鐵粉(2.91g，52.0mmol)、氯化銨(4.62g，86.5mmol)加入乙醇/水(12.5ml)中，並將得到的混合物加熱至90℃，攪拌1小時。 將反應液冷卻至室溫後，緩慢倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取(100ml×2)，有機相用飽和NaCl溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得1.8g黃色固體狀的粗品。
與實施例1的製備方法相同，除了用1-胺基-3,6,9-三氧雜-11-十一醇代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5-乙氧基)乙氧基]-乙氧基-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用2-[2-(2-胺基-乙氧基)乙氧基]乙醇代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-(4-乙氧基)乙氧基]-苯并咪唑-1-基-苯基)-脲。 與實施例1的製備方法相同，除了用乙醇胺代替步驟2中的2-(2-胺基-乙氧基)-乙醇，得到1-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(5-苯并咪唑-1-基)-苯基]-脲。
將4-[2-(1-4-[3-(5-第三丁基-2H-吡唑-3-基)-脲基]-苯基]-1H-苯并咪唑-5-基氧基)-乙基]-哌嗪-1-羧酸第三丁酯(500mg，9.2mmol)溶解於6ml二氯甲烷中，於室溫加入3ml三氟乙酸，攪拌1.5小時。 將反應液減壓濃縮，殘餘物溶於70ml水中，加胺水調PH至8~9，析出大量固體，過濾，用大量水洗固體，鼓風乾燥(60℃)3小時，得到360mg粗產品。 1-(4-胺基-苯基)-1H-苯并咪唑-5-醇(6g，0.027mol)溶解於於40mlDMF中，室溫下加入氫氧化鈉(1.38g，0.035mol)，加畢於40℃下攪拌1小時。 化療方法 滴加4-(2-甲磺醯氧基-乙基)-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(9.0g，0.029mol)的30mlDMF溶液，滴畢升溫70℃反應過夜。 將反應液冷卻至室溫，倒入200ml水中，用乙酸乙酯100ml×2萃取，有機相用飽和食鹽水150ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到8.2g粗品產物。 將步驟2得到的4-(5-胺基-3-第三丁基-吡唑-1-基)-哌啶-1-羧酸第三丁酯(210mg，0.652mmol)溶解於乙酸乙酯中。
J1和J2各自獨立地選自鹵素、羥基、胺基、炔基和羧基；Y、U、Y1、Y2、Y3、Y4、A、E、L、R1、R2如通式中所定義。 “任選”或“任選地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。 例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。 本發明進一步涉及根據本發明所述的通式所示的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學上可接受的鹽或者包含其的醫藥組成物在製備雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑中的用途。 本發明屬於醫藥領域，涉及一種新型雙功能蛋白降解靶向嵌合體類化合物、其製備方法及含有其的醫藥組成物，以及其用於降解和抑制FLT3酪胺酸蛋白激酶的用途，包括用於治療FLT3介導的信號通路異常引起的相關疾病的用途，特別是在癌症治療中的用途。 一種如請求項1至16中任一項所述的化合物或其內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其藥學 上可接受的鹽或者如請求項18所述的醫藥組成物在製備雙功能FLT3酪胺酸激酶降解劑和抑制劑中的用途。
與實施例54的製備方法相同，除了用5-溴戊酸乙酯代替步驟1中的7-溴庚酸乙酯，得到5-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)-N-(2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-側氧異吲哚-4-基)戊醯胺。 將[2-(1–1H-苯并咪唑-5-基氧基)-乙氧基]-乙酸第三丁酯370mg溶解於10ml二氯甲烷中，於室溫加入5ml三氟乙酸，攪拌3小時。 與實施例54的製備方法相同，除了用溴乙酸乙酯代替步驟1中的7-溴庚酸乙酯，並用3-胺基-5-第三丁基異噁唑代替步驟3中的5-第三丁基-2H-吡唑-3-基胺，得到2-(1–1H-苯并咪唑-5-基氧基)-N-[2-(2,6-二側氧哌啶-3-基)-1-氧-2,3-二氫-1H-異吲哚-4-基]-乙醯胺。
真核生物中編碼泛素的基因以串聯重複的方式排列，其八個不同的胺基酸殘基能夠在靶蛋白上形成複雜的多泛素鏈。 化療方法 泛素化是指泛素分子在一系列特殊的酶作用下，將細胞內的蛋白質分類，從中選出靶蛋白分子，對靶蛋白進行特異性修飾的過程，形成靶蛋白多聚泛素鏈。 泛素化是一個三酶級聯反應，即，需要有由三個酶催化的一系列反應的發生，整個過程也被稱為泛素化信號通路。 蛋白質泛素化是生物體內一種常見的翻譯後修飾，參與細胞週期、增殖、凋亡、分化、轉移等幾乎一切生命活動的調控。 E3泛素連接酶(在人類中已知有600多種)賦予泛素化底物特異性，由於其對某些蛋白質底物的特異性，其較一般的蛋白酶更具吸引力。 E3泛素連接酶的配體的開發已被證明具有挑戰性，部分原因是它們必須破壞蛋白質與蛋白質的相互作用。
與實施例83的製備方法相同，除了用84a(實施例13中製備)代替實施例83步驟2中的化合物1k，得到4-嗎啉基哌啶-1-羧酸(3-(4-((5-((1-(4-(3-(3-(第三丁基)-1H-吡唑-5-基)脲基)苯基)-1H-苯并咪唑-5-基)氧基)戊基)胺基)-1,3-二側氧異吲哚-2-基)-2,6-二側氧哌啶-1-基)甲基酯。 化療方法 4-哌啶基哌啶(841.4mg，5mmol)溶解於20mL二氯甲烷中，室溫加入三乙胺(1.01g，10mmol)，加畢，將反應體系降溫0-5℃。 慢慢滴加氯甲酸氯甲酯(644.7mg，5mmol，溶解於10ml二氯甲烷中)，加畢，緩慢升溫，室溫反應3小時。 TLC檢測反應完成，將反應液倒入100ml飽和氯化銨水溶液中，用二氯甲烷60ml×2萃取。 有機相用飽和食鹽水100ml×2洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得800mg白色固體產物。 將步驟4得到的4-(3-第三丁基-5–吡唑-1-基)-哌啶-1-甲酸第三-丁酯(3.0g，5.1mmol)溶解於乙酸乙酯中。