图3显示了克隆的第二步的图示，以产生含有所有腺病毒基因并带有El区中的M个碱基对缺失（其介导癌细胞中的选择性复制）的质粒。 结合Table 1的序列和激光共聚焦、流式细胞术实验所得的穿膜效率(图2)可以看出，putative成环的Cys位置和数量对穿膜结果有确切的影响作用。 序列V16-9，V16-3，V16-2， 副甲状腺癌 和V16-1的穿膜效果都低于ELBD。 与V16-3，V16-2相比，V16-1的效果更差，其与V16-9相当。
在本发明的一个实施方式中，所述方法或用途还包括施用化学疗法或抗CD20治疗或其它阻断中和抗体的方法。 “抗CD20治疗”指能够杀死CD20阳性细胞的试剂，可选自利妥昔单抗和其它抗CD20单克隆抗体。 副甲状腺癌 “阻断中和抗体的方法”指能够抑制通常由感染产生的抗病毒抗体的生成的试剂，可选自：不同的化疗剂、免疫调节性物质、肾上腺皮质素和其它药物。
副甲状腺癌: 副甲状腺がん
如权利要求12所述的缀合物，其特征在于所述诊断成分包含放射性诊断成分，荧光成分，量子点，或它们的组合物。 将TCS的基因序列与ELBD突变体核苷酸序列以及H2穿膜肽序列融合表达后，其TCS-ELBD-H2对B16(鼠黑色素瘤细胞)的抑制率显著提高(图7)。 选用11种细胞来研究EGFP-ELBD-HBD重组蛋白的肿瘤靶向性特征。 其中包括9种人体肿瘤细胞：HeLa(人宫颈癌细胞)、Bcap(人乳腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)，A357(人恶性黑素瘤)，T24(人膀胱癌细胞)，MGC-803(人胃癌细胞)，95D(人巨细胞肺癌细胞)，BxPC-3(人胰腺癌细胞)，5637(人膀胱癌细胞)，以及2种正常人体细胞：MRC-5(人胚肺成纤维细胞)，293T(人肾上皮细胞)。
对于所述检测而言，检测的极限和定量的极限是500vp/ml血清。 在相同的PCR操作（PCR run)中使用TaqMan外源性内部阳性对照试剂（Applied Biosystems)来就PCR抑制剂的存在测试各样品。 分析了分别来自患者K75和V136的腹水和胸腔积液的新鲜的、处理前的样品，在两种样品中均见到了 Ad5/3的高转导。 所述药物组合物可以是适于施用的任何形式，例如固体、半固体或液体形式。 制剂可选自（但不限于）：溶液、乳剂、悬浮液、片剂、丸剂和胶囊。 表 5 中报导了根据 RECIST 标准(Therasse P 等人 2000，J NatlCancer Inst 92， )对Ad5-DM-GM-CSF效力的评价。
副甲状腺癌: 副甲状腺がんの治療(PDQ)
在图12中所示的实例中，显示了来自患者R73的一个实例，其显示循环T reg的减少。 在分析的时候，将所有的样品融化并首先用CD4和CD127抗体对其进行染色，然后使细胞透化并对于转录因子你即3进行染色。 所产生的对于CD4为阳性、对于CD127为阴性并且R)xp3高的细胞被认为是有效的T调节细胞（T reg)(图12)。 收集了患者（用于Ad5-DM-GM_CSF治疗的患者)肿瘤的可得归档样本并通过免疫组织化学就CAR (腺病毒血清型5受体）的表达进行了分析。 在图7c中显示了对于下列腺病毒受体CAR的染色：癌细胞细胞质（M3)、空肠腺癌（C3)、胰腺癌（H7)、癌小叶浸润（R8)、 卵巢癌的肝转移（012)和滑膜肉瘤的肺转移（S23)。
⑤收集的上清液经过镍螯合亲和层析柱进行亲和层析分离。 和大多数镍螯合亲和层析纯化目标蛋白的方法类似，采用带有不同浓度的咪唑缓冲液进行梯度洗脱(20mM咪唑洗脱、50mM咪唑洗脱、200mM咪唑洗脱)，收集不同浓度咪唑洗脱下的目标蛋白组分。 和大多数镍螯合亲和层析纯化目标蛋白的方法类似，采用带有不同浓度的咪唑缓冲液进行梯度洗脱(20mM咪唑洗 脱、50mM咪唑洗脱、200mM咪唑洗脱)，收集不同浓度咪唑洗脱下的目标蛋白组分。 和大多数镍螯合亲和层析纯化目标蛋白的方法类似，采用带有不同浓度的咪唑缓冲液进行梯度洗脱(10mM咪唑洗脱、200mM咪唑洗脱、1M咪唑洗脱)，收集不同浓度咪唑洗脱下的目标蛋白组分。 和大多数镍螯合亲和层析纯化目标蛋白的方法类似，采用带有不同浓度的咪唑缓冲液进行梯度洗脱(20mM咪唑洗脱、200mM咪唑洗脱)，收集不同浓度咪唑洗脱下的目标蛋白组分。
副甲状腺癌: 副甲状腺腫瘍の
本申请描述了重组病毒载体的构建，与所述载体相关的方法和它们在肿瘤细胞系、动物模型及癌症患者中的用途。 一种所述肿瘤靶向多肽的制备方法，其包含培养权利要求26-27中之一所述宿主细胞，制备所述肿瘤靶向多肽。 如权利要求15所述的缀合物，其特征在于所述细胞穿膜肽为SEQ ID NO.12氨基酸序列所示的多肽，来自HIV的反式激活蛋白TAT的氨基酸片段，EC-SOD来源的肝素结合域的氨基酸片段，HBEGF来源的肝素结合域的氨基酸片段，或它们的衍生物。 副甲状腺癌 为了有效地分离纯化或分泌目标蛋白，常常还可利用便于分离纯化的标签蛋白或标签多肽。
而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。 在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。 通过磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染或其它方法，即可将本发明的核酸和核酸重组载体导入宿主细胞。
副甲状腺癌: 副甲状腺癌
32.根据权利要求19-31中任一项的用途或方法，其中所述方法还包括施用能够下调受试者中的调节性T细胞的物质。 31.根据权利要求19-30中任一项的用途或方法，其中所述方法还包括施用化学疗法或抗CD20治疗或其它用于阻断中和抗体的方法。 11.根据权利要求10的溶瘤性腺病毒载体，其中所述衣壳修饰是Ad5/3嵌合体，将整联蛋白结合（RGD)区和/或结合硫酸肝素的聚赖氨酸修饰插入纤毛中。 包含本发明的腺病毒载体的细胞可以是任何细胞，例如真核细胞、细菌细胞、动物细胞、人细胞、小鼠细胞等。 例如，所述细胞可被用于在体外、离体或在体内产生所述腺病毒载体，或者所述细胞可以是被所述腺病毒载体感染的靶标（例如肿瘤细胞）。
开放阅读框（ORFs)可以在相同的DNA链中或不同的DNA链中， 在本发明的优选实施方式中，El区包含病毒包装信号。 一种缀合物，其特征在于包含权利要求1至11任一项权利要求所述肿瘤靶向多肽和一种活性成分，二者通过一种连接器缀合；并且其中所述活性成分为治疗成分，诊断成分，放射性同位素，放射性核素，毒素，或它们的组合物。 结果显示，EGFP-ELBD-HBD重组蛋白对MRC-5和293T两种正常细胞几乎没有明显穿膜；而对HeLa，Bcap，A549，T24，A357等癌细胞都有不同程度的穿膜(图5)。
副甲状腺癌: 副甲状腺について
最常见的标志物包括但不限于促炎性细胞因子的增加、肿瘤或腺病毒特异性细胞毒性T细胞的增加、抗原呈递细胞的募集和活化或局部淋巴结尺寸的增加。 可根据本领域已知的任何常规方法来研究这些标志物的水平，所述方法包括但不限于利用抗体、探针、引物等的那些方法，例如ELISP0T检测、四聚体分析、五聚体分析和分析血液或肿瘤中的不同细胞类型。 在本发明的优选实施方式中，所述方法或用途还包括向受试者施用环磷酰胺。
- 采用DNA人工固相合成方法合成两端带Sal I和Xho I酶切位点的穿膜肽TAT核苷酸序列，分别插入到本实施例中已用Sal I+Xho I双酶切回收的EGFP-Tn-HBD-pET28a系列表达载体中，构建相应的带有TAT穿膜肽的EGFP-Tn-TAT-pET28a系列表达载体。
- 溶瘤性的细胞死亡允许免疫系统获得识别和杀死肿瘤细胞的能力。
- 此外，所述组合物可包含至少两种、三种或四种不同的本发明的载体。
- 为了避免受试者中的中和抗体，本发明的载体在治疗之间可变化。
- 选用11种细胞来研究EGFP-ELBD-HBD重组蛋白的肿瘤靶向性特征。
也有可能是缺失了这段序列，导致了第二个Cys的缺失，从而影响了这个结构域的空间结构成环。 副甲状腺癌 因为依据计算机模建的结果，第二个Cys和第三个Cys之间是不太可能形成一个环状结构的，可能的原因是两个Cys之间紧靠有一段putatively形成α-螺旋结构的序列，造成两者间二硫键形成的困难。 副甲状腺癌 副甲状腺癌 图9a_b中显示了在Ad5-DM-GM_CSF治疗之前和之后，患有卵巢癌的患者和患有间皮瘤的患者（见表1)的CT扫描。 使用提取自Ad5/3-DM-Cox2L(lX vp/ml)在正常人血清中的系列稀释液的 DNA来生成回归标准曲线。
副甲状腺癌: 患者さんの手記
肿瘤细胞是由于溶瘤性腺病毒在肿瘤细胞中的复制而被所述病毒杀死的，复制的最后时期导致数千的病毒粒子被释放到周围的肿瘤组织中用于有效的肿瘤穿透和脉管再次感染。 肿瘤细胞允许病毒的复制而正常的细胞由于病毒基因组中经改造的变化而幸免，所述变化防止在非肿瘤细胞中复制。 表皮生长因子受体家族的成员包括ErbB1/HER1/EGFR，ErbB2/HER2，ErbB3/HER3和ErbB4/HER4四种，同属于酪氨酸激酶类受体。 人EGFR蛋白由1186个氨基酸残基的组成，相对分子量为17万道尔顿。