在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第二次純化之流速為約100至160 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為8 利拉魯肽 cm x 12.6 cm時，第二次純化之流速為約152 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為4.6 mm x 100 mm時，第二次純化之流速為約0.3至0.5 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為4.6 mm x 100 mm時，第二次純化之流速為約0.4 mL/min。
在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 250 mm 時，第一次純化的流速為4至8 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 250 mm時，第一次純化的流速為約4.7 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 cm × 22 cm至8 cm × 12.6 cm時，第二次純化的流速為約50至200 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 cm × 22 cm至8 cm × 12.6 cm時，第二次純化的流速為約100至160 mL/min。
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如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該第二次RP-HPLC純化使用包含銨鹽或磷酸鹽的流動相C以及包含乙腈的流動相D。 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中步驟中的溶液包含體積百分比15-20%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和0.1-1%的氟化酸。 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中步驟中的溶液包括體積百分比5-35%的氟化醇和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比10%至60%的銨鹽水溶液。
在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm時，第一次純化之流速為約104 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約152 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為10 mm x 250 mm時，第一次純化之流速為4至8 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為10 mm x 250 mm時，第一次純化之流速為約4.7 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第二次純化之流速為約50至200 mL/min。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比20%至60%、30%至60%、4%至60%或約50%的銨鹽水溶液。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比約50%的銨鹽水溶液。 在某些具體實施例中，流動相A及流動相B各包括體積百分比0.1-1%的三氟乙酸。
將990.3 mg利拉魯肽粗肽溶於11.22 mL六氟異丙醇（HFIP）溶液（0.2%TFA溶液中含17%HFIP）中。 將所取得的溶液裝載於填充C8，10 μm矽膠的RP-HPLC製備管柱中，管柱直徑和長度為5 cm × 22 cm，裝載量為19.5 g。 利拉魯肽 利拉魯肽 將19.5 g利拉魯肽粗肽溶於238 mL六氟異丙醇（HFIP）溶液（0.2% TFA溶液中含17% HFIP）中。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比約17%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）和約0.2%的三氟乙酸。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比約25%的2,2,2-三氟乙醇（TFE）和約0.2%的三氟乙酸。 具體實施例 34：如具體實施例 29之方法，其中第二次RP-HPLC純化使用包含銨鹽或磷酸鹽之流動相C及包含乙腈之流動相D。 具體實施例 27：如具體實施例 26之方法，其中步驟之溶液包含體積百分比15-20%之1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇與0.1-1%之氟化酸。 具體實施例 26：如具體實施例 22之方法，其中步驟之溶液包含體積百分比5-35 %之氟化醇與0.1-1%之氟化酸。
在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約15 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約15 mM之銨鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括濃度為約20 mM之磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用包括銨鹽水溶液之流動相C及包括銨鹽與乙腈之水溶液之流動相D。 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用包括銨鹽水溶液之流動相C且流動相D為乙腈。
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在一些具體實施例中，第一次RP-HPLC純化使用包括三氟乙酸與水之流動相A及包括三氟乙酸與乙腈之流動相B。 在一些具體實施例中，步驟之RP-HPLC純化系統包括第一次RP-HPLC純化與第二次RP-HPLC純化；第一次RP-HPLC純化係於pH值小於7之下進行；以及第二次RP-HPLC純化係於pH值大於7之下進行。 在第三態樣中，本發明提供一用於純化利拉魯肽之方法，本方法包括： 將粗利拉魯肽溶於包含鹵化溶劑之溶液中；以及 利拉魯肽 將溶液置於RP-HPLC純化系統中，並收集經純化之利拉魯肽分液。 如申請專利範圍第14項所述之方法，其中該流動相D於線性梯度下由體積百分比0-10%被沖提至50-100%。 如申請專利範圍第14項至第16項任一項所述之方法，其中該流動相C包含在水中濃度為5-50mM的銨鹽或磷酸鹽。
具體實施例 21：一用於純化利拉魯肽之方法，其包含： 將粗利拉魯肽溶於包含鹵化溶劑之溶液中；以及 將溶液置於RP-HPLC純化系統中，並收集經純化之利拉魯肽分液。 第一與第二次純化之流速取決於RP-HPLC製備管柱之尺寸。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm 利拉魯肽 x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約50至200 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約100至160 mL/min。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 利拉魯肽 cm × 22 cm至8 cm × 12.6 cm時，第一次純化的流速為約100至160 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為5 cm × 22 cm時，第一次純化的流速為約104 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為8 cm × 12.6 cm 時，第一次純化的流速為約152 mL/min。
- 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比約25%的2,2,2-三氟乙醇（TFE）和約0.2%的三氟乙酸。
- 在一些具體實施例中，流動相C包括濃度為20 mM之磷酸氫二鉀與磷酸二氫鉀之水溶液。
- 當本申請案與本文提供之參考文獻之間存在衝突時，以本申請案為主。
- 該方法包括： 將利拉魯肽粗肽溶於包含鹵化溶劑的溶液中；及 將該溶液置於RP-HPLC純化系統中純化，並收集經純化的利拉魯肽組份。
- 在一些具體實施例中，流動相D包括15 mM甲酸銨之水溶液與乙腈；以及pH值為約8.3，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。
- 如申請專利範圍第11項或第12項所述之方法，其中該流動相B於線性梯度下由體積百分比5-25%被沖提至80-100%。
- 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比20%至60%、30%至60%、4%至60%或約50%的銨鹽水溶液。
將30 g之粗利拉魯肽溶於500 mL之三氟乙醇溶液(含有25% TFE之0.2%三氟乙酸)中。 具體實施例 39：如具體實施例 34之方法，其中流動相D係以體積百分比0-10 %至50-100%之線性梯度沖提。 具體實施例 37：如具體實施例 34之方法，其中流動相C包含在水中濃度為5至50 mM之銨鹽或磷酸鹽。 具體實施例 33：如具體實施例 32之方法，其中流動相B係以體積百分比5-25%至80-100%之線性梯度沖提。 具體實施例 32：如具體實施例 31之方法，其中流動相A與流動相B各包含體積百分比0.1-1%之三氟乙酸。 具體實施例 31：如具體實施例 29之方法，其中第一次RP-HPLC純化使用包含三氟乙酸與水之流動相A及包含三氟乙酸與乙腈之流動相B。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在某些具體實施例中，流動相C包括在水中濃度約20 mM的銨鹽。 在某些具體實施例中，流動相C包括在水中濃度為約20 mM的磷酸鹽。 在某些具體實施例中，流動相C包括20 mM的磷酸鹽水溶液。
- 在一些具體實施例中，流動相E包括濃度為20 mM之磷酸氫二鈉水溶液。
- 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 250 mm時，第一次純化的流速為約4.7 mL/min。
- 在一些具體實施例中，流動相D之pH值為約7.5至約9.0或約7.5至約8.5。
- 在某些具體實施例中，該方法進一步包括： 使用包含鈉鹽、水和乙腈的流動相E對步驟中的組份進行第三次RP-HPLC純化；並收集組份以取得鹽交換的利拉魯肽。